Síntesi de pèptids difícil i hidrofòbica

Síntesi de pèptids difícils|Personalització de pèptids hidrofòbics|Síntesi de pèptids difícils|Síntesi de seqüències de clústers|Ciència-pèptid

La seqüència de pèptids massa hidròfoba? Agregar fàcilment? Múltiples parells d'enllaços disulfur? Ciència-Els serveis de síntesi de pèptids difícils i de síntesi de pèptids hidrofòbics de Peptide s'especialitzen en tot tipus de "no es pot fer". 20 anys d'experiència, sistemes de dissolvents especials, lliurament estable. Si us plau, no dubteu a contactar amb nosaltres.

Quin tipus de pèptids es consideren "difícils"?
Després d'haver estat al negoci de la síntesi de pèptids durant 20 anys, he vist tot tipus de pèptids difícils. Quan els clients ens venen, ja han preguntat a diverses empreses, i la resposta que reben és o bé "no puc fer-ho" o "Prova-ho, sense garantia".

Pèptid amb forta hidrofobicitat: regió transmembrana, pèptid senyal, aminoàcid hidròfob, quan es sintetitza, s'agruparà a la resina i l'aminoàcid que hi ha darrere no podrà entrar.
Els pèptids que s'agreguen fàcilment, com ara els pèptids amiloides i antimicrobians, s'amunteguen quan es sinteteixen i obstrueixen la columna quan es purifica.
Pèptids amb múltiples parells d'enllaços disulfur: més de tres parells, un pas equivocat en l'ordre d'aparellament i tota la molècula està arruïnada.
Pèptid llarg: més de 60 aminoàcids, cada pas del rendiment va disminuint, i al final no queda res.
Combinació complexa de modificacions: fosforilació, fluorescència, ciclització i condicions que lluiten entre elles.
Podem agafar-los tots, i no és “provar”, és “tenir un pla”.

1. Pèptids hidrofòbics: amb sistemes de dissolvents especialitzats
La dificultat dels pèptids hidrofòbics rau en el fet que no es poden dissoldre en dissolvents convencionals i, quan es sintetitza, la cadena peptídica "s'agrupa" a la resina, fent impossible que els aminoàcids que hi ha darrere entrin.

La nostra solució:
Combinació especial de dissolvents: sistema mixt DMF, NMP, DCM, més una mica d'agent d'alliberament líquid, de manera que la cadena peptídica s'ha mantingut estirada.
Optimització de la temperatura: algunes reaccions són millors a 40 graus que la temperatura ambient, algunes s'han de baixar a 0 graus, les hem provat una per una.
Selecció de resina: utilitzeu resina d'alta solubilitat per als pèptids hidrofòbics per deixar prou espai per a les cadenes peptídiques.
Etiquetes solubilitzades: si no podeu, afegiu una etiqueta hidròfila i talleu-la després de la síntesi.

Cas real: un pèptid transmembrana 35aa, els aminoàcids hidrofòbics representaven el 70%, el client va buscar tres empreses no es pot fer. Vam canviar el sistema de dissolvents i vam afegir una etiqueta solubilitzant, finalment la puresa va ser del 92% i el client va fer l'estudi de l'estructura sense problemes.

2. Múltiples parells d'enllaços disulfur: sense sort, estratègia
Com més enllaços disulfur hi hagi, més difícil serà emparellar-los. Dues parelles estan bé, però tres o més parelles, i un pas equivocat i tot s'ha acabat.
La nostra estratègia:
Protecció ortogonal: Cys es pot obrir i emparellar en passos mitjançant diferents grups de protecció, com ara Trt, Acm, tBu.
Optimització de les condicions d'oxidació: oxidació de l'aire, oxidació del glutatió, oxidació del iode, diferents mètodes per a diferents pèptids.
QC intermedi: després de cada parella, preneu una mostra per a MS i confirmeu l'aparellament abans de continuar.
Confirmació MS/MS (opcional): ruptura final-amb espectrometria de masses secundària per veure on s'uneixen realment els enllaços disulfur.

A real case: A conotoxin peptide containing four pairs of disulfide bonds was rejected by many companies. We designed a four-step oxidation strategy, which took six weeks, and delivered >90% de puresa, enllaços disulfur aparellats correctament i l'estructura cristal·lina va ser resolta posteriorment pel client.

3. Pèptids propensos a l'agregació-: sintetitzen mentre es defensen
A alguns pèptids els agrada agregar-se de forma natural, com ara la proteïna amiloide i el pèptid antibacterià. Comencen a agregar-se quan es sintetitzen, bloquegen la columna quan es depuren i no es poden dissoldre quan estan a la mà.
La nostra solució:
Pseudoprolina: la pseudoprolina s'introdueix a la posició Ser/Thr per interrompre la tendència d'agregació i tornar a canviar després de la síntesi.
Síntesi segmentària: els pèptids que estan massa polimeritzats es tallen en diversos segments i es sintetitzen per separat, i després es tornen a connectar al final.
Optimització de les condicions de purificació: alta temperatura, pH àcid, addició de dissolvents orgànics per trobar condicions que el facin no-polimeritzant.

4. Combinacions de modificadors complexes: condicions sense baralles
Alguns pèptids tenen múltiples requisits: fosforilació, marcatge fluorescent i ciclització. Aquestes modificacions poden entrar en conflicte entre si - per exemple, la fosforilació és àcid-fòbica, l'etiquetatge fluorescent és lleuger-fòbic i la ciclització requereix un pH específic.
El nostre enfocament:
Disseny de l'estratègia de conservació: quin retall fer primer, quin retall fer més tard, dissenyat amb antelació.
Condicions ortogonals: Les condicions de cada pas de la reacció no afecten les modificacions ja fetes.
Control de qualitat intermedi: després de cada pas de modificació, preneu una mostra per assegurar-vos que es fa correctament abans de continuar.

5. Puresa: en funció del que en facis

Cada pèptid va acompanyat d'un informe HPLC i MS, fent transparents les dades de puresa.

1. Portem 20 anys fent això
La síntesi de pèptids difícils no és una cosa que qualsevol pugui fer. Al llarg dels anys hem manejat molts pèptids difícils: proteïnes transmembrana, pèptids de fusió viral, conotoxines, proteïnes amiloides, pèptids antimicrobians, etc. Tenim una bona idea de quines seqüències són propenses a tenir problemes i quines condicions són capaces de salvar-les. Almenys no heu de provar-ne tots si veniu a nosaltres per a una síntesi de pèptids hidrofòbics difícils.

2. No és “provar”, és “tenir un programa”.
Moltes empreses prenen pèptids difícils i diuen: "Ho provarem, però no ho garantim". No juguem així. Abans d'acceptar una comanda, avaluarem la seqüència, quina és la proporció d'aminoàcids hidrofòbics, si hi ha alguna tendència d'agregació coneguda, quants parells d'enllaços disulfur i si la modificació és complexa o no. Després de l'avaluació, us direm: quina és la taxa d'èxit i quant de temps és el cicle.

No prenem ordres que no es poden fer, i hem de lliurar les ordres que hem pres.

3. Sistemes de dissolvents especialitzats per a la hidrofobicitat
El pèptid hidrofòbic és el nostre punt fort. Si el dissolvent convencional no es pot dissoldre, canviarem el dissolvent; si la temperatura convencional no reacciona, ajustarem la temperatura; si la resina convencional no aguanta, canviarem la resina. També hi ha l'etiqueta solubilitzant com a sortida posterior.

4. Múltiples parells d'enllaços disulfur, pas-a-pas
Si hi ha més de tres parells d'enllaços disulfur, farem un enfocament-a-pas a pas: el primer pas és protegir A i obrir el primer parell; protegir B ​​i obrir el segon parell; protegir C i obrir el tercer parell. Després de cada pas, prenem mostres per a MS i confirmem l'aparellament abans de continuar. Finalment, el MS/MS es trencarà i es verificarà, i les dades se us donaran sense que ho endevineu.

5. Control de qualitat: dades a cada pas
El control de qualitat dels pèptids difícils ha de ser més acurat:
QC intermedi: després de cada fragment i cada pas de modificació, mesureu primer la puresa i el pes molecular.
Producte final: HPLC per a la puresa, MS per al pes molecular.
Prova de solubilitat: proporcioneu dissolvents i mètodes de solubilització recomanats, de manera que no obtingueu pèptids que no es dissolguin.
Fent una síntesi de pèptids difícil i hidrofòbica, les dades parlen per si soles, es pot rastrejar cada pas.

• Forma de lliurament: pols liofilitzada, tubs de centrífuga o vials.
• Documents acompanyants: COA (perfil HPLC + espectre MS), informe de síntesi (opcional).
• Proves opcionals: contingut en pèptids, endotoxina, humitat, composició d'aminoàcids, prova de solubilitat.
• Embalatge personalitzat: porcions i marcatge segons les vostres necessitats.
• Tots els productes de síntesi de pèptids difícils i hidrofòbics es revisen per garantir que la seqüència sigui correcta i que la puresa estigui a l'estàndard abans de ser enviat.

Tant si has estat rebutjat per altres persones com si no pots fer-ho al teu propi laboratori, pots parlar amb nosaltres. Si busqueu Ciència-pèptid per fer una síntesi de pèptids hidrofòbics difícils, almenys no cal que ho intenteu un per un.

Necessito que em digueu:
Seqüència de pèptids (o informació objectiu)
Has tingut algú més que ho fes abans? Quin és el resultat?
Quant (mil·ligrams)
requisits de puresa

Quan el vols?

Oferiu-vos una avaluació de viabilitat i un pressupost del programa en 24 hores.