Impureses de tirzepàtida

Impureses de tirzepàtida|Control d'impureses de tilpèptid|Confirmació d'estructura i síntesi personalitzada d'impures|Ciència-pèptid

Control d'impureses de tirzepàtida - per a GLP-1/GIP investigació de qualitat de fàrmacs objectiu dual-, informes genèrics de fàrmacs. Ciència-Peptide proporciona una síntesi personalitzada d'impureses relacionades amb tilpèptids, inclosos pèptids de supressió, impureses oxidades, dades d'exfoliació d'àcids grassos, etc. estudi d'espectroscòpia d'impureses amb dades de confirmació estructural. Benvingut a contactar amb nosaltres.

Tirzepatide (Tirzepatide) és l'agonista dual GLP-1/GIP que va inventar Eli Lilly, i ha estat en ple apogeu aquests dos anys. Té un bon efecte de reduir el sucre i un fort efecte de reducció de pes, i s'anomena la versió actualitzada de "el fàrmac miracle per a la pèrdua de pes". Els fabricants nacionals de fàrmacs genèrics de pèptids, molts s'ho estan mirant - després de l'expiració de la patent, qui primer pot passar per la qualitat de la investigació, que tindrà l'oportunitat d'agafar el primer genèric.

 

Tanmateix, la qualitat del tilpèptid no és tan fàcil d'estudiar. És més complex que la simeticona, amb 39 aminoàcids, una cadena lateral d'àcids grassos (àcid eicosanodioic) i un enllaç. Les impureses que poden aparèixer durant el procés de síntesi són molt superiors a les dels pèptids ordinaris. Els pèptids que falten, les impureses oxidatives, els productes d'eliminació d'àcids grassos, els dímers, les impureses relacionades amb l'enllaç-ha de tenir un control, cadascun ha de ser clar.

 

Hem acumulat molta experiència en la síntesi d'impureses de pèptids complexos. Ens hem especialitzat en l'estudi del tilpèptid, i sabem quines són les dificultats del seu perfil d'impureses i quins són els elements essencials de control. Podem personalitzar la síntesi de diversos controls d'impureses de tilpèptids segons les vostres necessitats, amb dades de confirmació de l'estructura, i ajudar-vos a establir el mètode perquè tingueu menys probabilitats de rebre un suplement en presentar-vos.

L'estructura molecular del tilpèptid determina que el seu perfil d'impureses és molt més complex que el dels pèptids generals. Quan fem estudis d'impureses, ens centrem principalment en aquestes categories:

Falta pèptid
Els 39 aminoàcids, qualsevol dels quals es perd durant el procés de síntesi, és una impuresa. Els temps de retenció dels pèptids que falten a HPLC es van distribuir àmpliament, amb diferent polaritat dels pèptids que falten en diferents posicions. Alguns falten a l'extrem N-, alguns al mig i altres a prop del lloc d'unió d'àcids grassos. Hem rebut una comanda d'un client de 15 pèptids que falten en diferents posicions per localitzar totes les possibles impureses que falten en el seu procés.

Impureses oxidants
Met en la seqüència de tilpèptid és susceptible a l'oxidació a sulfòxid i després a sulfona. Les impureses oxidades sovint apareixen en estudis d'estabilitat i creixen després d'un període de temps. Hem fet una comparació, en condicions accelerades durant un mes, el pic d'oxidació pot créixer fins a més del 0,3%, sense control.

Productes d'eliminació d'àcids grassos
Aquesta és una impuresa exclusiva del tilpèptid. La seva cadena lateral d'àcids grassos (àcid eicosanodioic) s'uneix a la lisina mitjançant un enllaç, i aquesta modificació es pot eliminar parcialment durant la síntesi o l'emmagatzematge, donant com a resultat que els àcids grassos-eliminin les impureses. De manera més problemàtica, l'eliminació es pot produir en diferents ubicacions - entre l'àcid gras i l'enllaç, o entre l'enllaç i el pèptid - donant lloc a diferents impureses. Hem sintetitzat diverses impureses relacionades amb els àcids grassos-per als nostres clients, que van des de l'eliminació completa fins a només una petita secció.

Dímers/polímers
Dues o més molècules de tilpeptides s'agrupen per formar un dímer o superior. El pes molecular del dímer és el doble que el del pic principal, i sovint és un pic ampli en HPLC, de manera que s'ha de separar i purificar especialment abans que es pugui utilitzar com a control. Hem fet la preparació de dímers, i es van necessitar diverses rondes de purificació per aconseguir una puresa de més del 95%.

Impureses-relacionades amb l'enllaçador
La modificació d'àcids grassos del tilpèptid utilitza un enllaç (per exemple, -Glu, PEG, etc.), i aquest enllaç en si pot produir reaccions secundaries durant la síntesi, generant impureses amb enllaçadors que falten o estan incomplets. Aquest tipus d'impuresa no es troba en pèptids comuns, però és exclusiva del tilpeptide, que s'ha d'estudiar específicament.

Impureses desamidades
L'asparagina (Asn) i la glutamina (Gln) es desamidan fàcilment en condicions àcides o de calor, donant lloc a isòmers. Hi ha diversos Asn i Gln a la seqüència de tilpèptid, i la impuresa de desamidació apareix sovint a la prova de degradació forçada, de manera que s'ha d'utilitzar el producte de control per localitzar la impuresa.

Diastereoisòmers
Durant la síntesi de cadena llarga, els aminoàcids individuals poden patir racemització, donant lloc a diastereoisòmers. El contingut d'aquest tipus d'impureses no sol ser elevat, però els experts preguntaran quan declarin, i és millor tenir un producte de control per a la confirmació.

Moltes d'aquestes impureses no es poden comprar i s'han de sintetitzar personalment. Hem fet molts projectes sobre la personalització d'impureses de tilpèptid, que cobreixen totes les categories anteriors.

La supressió de la sèrie de pèptids
We synthesize whatever is missing. For example, the lysine at position 20 is missing, or the amino acid near the fatty acid attachment site is missing. We will synthesize according to your process impurity profile, and the purity is usually >95%, amb confirmació de MS i RMN. Hem sintetitzat un conjunt de pèptids amb un espai de 5 aminoàcids des del N-terminal fins al C-terminal.

Impureses oxidants
Met in Tilpeptide is oxidized to sulfoxide or sulfone, and we can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control product. We can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control. The purity is >95% i podem proporcionar l'espectre LC-MS per confirmar el grau d'oxidació. El sulfòxid i la sulfona es separen per HPLC, i podem fer les dues coses.

Productes d'eliminació d'àcids grassos
Aquesta és una de les impureses més difícils de treballar amb el tilpèptid. La cadena d'àcids grassos pot estar completament apagada o parcialment (per exemple, falten els últims carbonis). Podem sintetitzar una sèrie de variants per a diferents posicions de la cadena. En un dels projectes més complicats que hem fet, el client ens va demanar que sintetitzéssim una impuresa amb 8 carbonis que falten a la cadena d'àcids grassos, i vam trigar dos mesos a encertar-ho.

Dimer
Els dímers formats per-enllaços creuats o interaccions no-covalents es poden preparar mitjançant diferents mètodes i aïllar-los i purificar-los per proporcionar controls d'alta puresa. Els dímers són laboriosos de purificar, però tenim l'experiència per saber separar els monòmers.

Impureses-relacionades amb l'enllaçador
L'enllaçador (-Glu, PEG, etc.) pot ser que falti o estigui incomplet, donant lloc a una sèrie d'impureses relacionades. Podem sintetitzar diverses variants amb enllaçadors que falten, enllaçadors escurçats o enllaçadors no coincidents, i ajudar-vos a crear l'espectre d'aquestes impureses.

Impureses desamidades
Per als llocs Asn i Gln de la seqüència, podem preparar controls d'impureses desamidats mitjançant degradació forçada o síntesi dirigida. La diferència de pes molecular després de la desamidació és només 1, cosa que no és fàcil de distingir per MS, de manera que normalment utilitzem RMN o condicions cromatogràfiques especials per confirmar.

Altres impureses personalitzades
Si trobeu una nova impuresa desconeguda a la vostra recerca, us podem ajudar a analitzar l'estructura i sintetitzar-la. Envieu-nos les mostres, farem una anàlisi LC-MS, en deduirem l'estructura, després la síntesi direccional i després compararem el temps de retenció i l'espectre de masses per confirmar l'acord. Hem fet aquest procés moltes vegades i la taxa d'èxit és força alta.

Desenvolupament i validació de mètodes analítics
Quan es configura un mètode HPLC o LC-MS, cal un control d'impureses per a la localització, la determinació de la separació, la verificació del rang lineal i la recuperació. Sense el control, a la validació del mètode li falta una peça. Molts clients ens demanen que primer fem algunes impureses clau per configurar el mètode i, a continuació, recuperem la resta.

Espectrometria de masses heterogènia
Quan es declara un medicament genèric, es requereix una anàlisi qualitativa i quantitativa integral de les impureses del procés i dels productes de degradació. La ubicació, el contingut i l'estructura de cada impuresa s'han de confirmar mitjançant un producte de control. Hem vist que la declaració de la informació s'ha enviat a omplir, nou de cada deu vegades és que les impureses d'aquesta peça no s'entenen.

Estudis d'estabilitat
En proves d'estabilitat-a llarg termini i accelerades, cal determinar quins productes de degradació són dominants i quina és la tendència del contingut. Amb el control d'impureses, podem quantificar i controlar amb precisió. Un client estava fent l'estabilitat de la preparació del tilpèptid i va trobar que un pic de degradació creixia molt ràpidament en condicions accelerades, de manera que el vam analitzar i sintetitzar per MS per confirmar l'estructura i, aleshores, el client es va sentir alleujat per informar-ho.

Prova d'alliberament per lots
Després de la comercialització, cada lot d'API o formulació s'ha de provar per a la substància en qüestió. Els controls d'impureses són eines essencials per a les proves d'alliberament.

Informació sobre declaracions de medicaments genèrics
Els estudis d'impureses són una secció clau de la informació de presentació. Proporcionar un perfil complet d'impureses i dades de control redueix significativament el risc d'una publicació de revisió.

Cas 1: una empresa farmacèutica, programa de medicaments genèrics de tilpeptide
Estan desenvolupant una versió genèrica de tilpeptide i necessiten un conjunt complet de controls d'impureses per a la validació del mètode. Hem personalitzat 12 impureses per a ells: 5 pèptids que falten, 2 impureses oxidades, 1 dímer, 2 productes d'eliminació d'àcids grassos i 2 impureses relacionades amb l'enllaç-. Cadascun d'ells té una puresa superior al 95% i s'acompanya de dades de MS i RMN. El líder del projecte va dir: "Les impureses del tilpèptid són el doble que altres pèptids, però podeu fer-les totes i les dades estan completes, cosa que ens estalvia molta feina". Més tard, la validació del seu mètode es va completar amb èxit, i ara s'estan preparant per a la declaració.

Cas 2: una empresa CRO, perfils d'impureses
Van dur a terme un projecte d'investigació de qualitat sobre el tilpèptid, que va requerir una anàlisi exhaustiva de les impureses del procés. Ens van enviar les mostres de pèptids bruts i vam realitzar una anàlisi de LC-MS, vam deduir les possibles estructures de diverses impureses desconegudes, després les vam sintetitzar de manera específica i vam comparar els temps de retenció i els espectres de masses, i vam confirmar quatre noves impureses - dues d'elles estaven relacionades amb l'enllaç-, i dues d'elles amb variants d'eliminació d'àcids grassos. El client va utilitzar aquestes dades per refinar els perfils d'impureses i va passar amb èxit l'acceptació del client.

Cas 3: Estudis d'estabilitat, empresa de biotecnologia
Estaven examinant l'estabilitat d'una formulació de tilpèptid i van trobar que la quantitat d'un producte de degradació augmentava ràpidament en condicions accelerades, però no sabien què era. Vam analitzar la mostra mitjançant LC-MS i vam suposar que es tractava d'una impuresa de desamidació en un lloc Asn determinat, i després la vam sintetitzar de manera específica i la vam confirmar per comparació. Van establir un assaig amb aquest control i van controlar amb precisió la tendència del producte de degradació. Posteriorment, quan van presentar l'informe, aquesta part de les dades va ser remarcada pels experts, i per les dades sòlides no es va emetre cap indemnització.

El tilpèptid és un producte popular, però l'estudi d'impureses és una feina delicada, especialment els productes d'exfoliació d'àcids grassos i les impureses relacionades amb l'enllaç-, que molts fabricants no poden gestionar. Si esteu fent recerca de qualitat o desenvolupament genèric de tilpeptide i necessiteu controls d'impureses, no dubteu a contactar amb nosaltres. Hem fet molta feina, sabem quines són les dificultats i sabem com superar-ho.